Tissue culture of human kidney epithelial cells of proximal tubule origin

Abstract

Tissue culture of human kidney epithelial cells of proximal tubule origin. The in vitro culture of human kidney epithelial cells of defined nephronal origin would prove valuable in a variety of studies defining the factors and mechanisms responsible for diseases and disorders of the kidney. In this study we have tested the hypothesis that employing a serum-free growth medium allows the selective cultivation of human kidney epithelial cells. It is demonstrated that human kidney cortex, explanted into serum-free hormonally defined growth medium gives rise to a primary culture of kidney epithelial cells of homogenous morphology capable of hemicyst formation. While these cells were able to proliferate to confluency as an expiant culture, they were unable to undergo stable subculture. Subsequent manipulation of the culture vessel surface (an initial coat of bovine type I collagen followed by the absorption of macromolecules from fetal calf serum) yielded cultures able to be subcultured with growth to at least 30 cell generations. These cells were identified to be of proximal tubule origin by employment of enzyme histochemistry, immunohistochemistry, and ultrastructural examination.

Culture tissulaire de cellules épithéliales de reins humains d'origine tubulaire proximale. La culture in vitro de cellules épithéliales de reins humains d'origine néphronique bien définie pourrait s'avérer utile dans de nombreuses études définissant les facteurs et les mécanismes responsables des maladies et de règlements du rein. Dans cette étude, nous avons testé l'hypothèse selon laquelle l'emploi d'un milieu de croissance sans sérum permet la culture sélective de cellules épithéliales de rein humain. Il est démontré que le cortex rénal humain explanté dans un milieu de croissance sans sérum, bien défini au point de vue hormonal, donne naissance à une culture primaire de cellules épithéliales rénales de morphologie homogène, capable de former des hémicystes. Bien que ces cellules soient capables de proliférer jusqu'à confluence en culture à partir d'explants, elles sont incapables de subir une culture secondaire stable. Une manipulation ultérieure de la surface du récipient de culture (une couche initiale de collagène bovin de type I suivi par l'absorption de macromolécules provenant de sérum de veau foetal) a permis des cultures capables d'être cultivées de façon secondaire avec une croissance d'au moins 30 générations cellulaires. Ces cellules ont été identifiées comme étant d'origine tubulaire proximale, en utilisant un examen enzymatique histochimique, immunohistochimique, et ultrastructural.